2022年北京冬奥会的抗疫“黑科技”—给空气做核酸检测！你听说了吗？空气核酸新技术全名：生物气溶胶新冠病毒监测系统。由便携式气溶胶采集器将空气采集后经一体化新冠病毒核酸检测仪检测。 

与咽拭子/鼻拭子取样方式不同，由于新冠病毒可以通过气溶胶传播且空气样本不便于采集，因此采用便携式气溶胶采集器收集空气，吸进来的空气会在采集器管内形成简易版“龙卷风”，颗粒物与空气分离。利用完的空气被排出，剩余气溶胶颗粒富集进入下一步的检测环节。

检测环节与普通的新冠病毒核酸检测原理则相同，即利用TaqMan探针法荧光定量PCR技术。通过Taq酶的3’-5’外切酶活性，切断探针从而产生荧光信号，通过荧光信号强度检测PCR产物的扩增量。

TaqMan探针法荧光定量实验，在科研中适用也较为广泛。使用TaqMan探针法进行荧光定量实验时，以下几个方面不得不注意：

1、探针的选择非常重要，一般规则如下：

1）选择报告荧光基团时首先要确认激发波长和发射波长与仪器是匹配的。对于多重荧光反应，标记不同探针的报告基团染料的最大发射波长应该至少有15 nm的差异。

2）对于淬灭荧光基团，必须要保证其吸收光谱与报告基团的发射光谱有重合。

3）尽量不要选择TAMRA作为淬灭基团。因为TAMRA本身就是个荧光基团，虽然它也有淬灭作用，但也会加强本底荧光强度。

4）荧光报告基团还要与荧光定量PCR仪相适配，具体适配性可根据荧光定量PCR仪选择。

表1. 淬灭基团种类以及使用的报告基团种类的选择

2、实验中不太注意的细节，对于实验的成功也起着至关重要的作用。

1）检测结果无Ct值？

可能原因：除了探针的降解或设计不足外，模板的浓度不够、反复冻融及反应程序循环数不足，也会出现无Ct值的情况。

2）NTC或阴性样本起峰？

可能原因：首先考虑污染的情况，在实验中要注意及时更换手套、qPCR Mix、水、引物等，尽量在超净工作台内完成实验，避免气溶胶污染。其次探针引物的特异性差也会出现NTC/阴性样本起峰的情况。

3）同一样品重复中，其中某一个荧光信号特别强？

可能原因：配制试剂时反应液未完全溶化/未混匀，复孔间样品/引物量不同；荧光定量PCR仪器被荧光物质污染，实验中要注意清理。

3、想要荧光定量PCR曲线完美，实验中方方面面不仅要注意好，优质试剂当然也很重要！

擎科生物qPCR系列试剂产品（表2），针对TaqMan探针法荧光定量PCR实验。快速耐脏型探针法专用qPCR试剂，含经抗体修饰的热启动DNA聚合酶及优化的反应缓冲液系统，配套的ROX Reference Dye I/II可用于校正仪器孔间误差， 扩增特异性和灵敏度高。

表2. 擎科分子试剂目录

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