识别位点

Endo H 和 Endo Hf 仅切割高甘露糖型结构(high mannose structures)(n = 2-150,x =(Man)1-2
y = H)和杂合型结构(hybrid structures)(n = 2,x 和/或 y = AcNeu-Gal-GlcNAc)。

特性

 去除糖蛋白中的 N-连接高甘露糖

概述

糖苷内切酶 H 是一种重组糖苷酶,能够对 N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构进行切割。
 

来源

糖苷内切酶 H 克隆自褶皱链霉菌(Streptomyces plicatus)并在 E. coli 中高度表达。

反应条件

将糖蛋白在 1X 糖蛋白变性缓冲液(含 0.5% SDS,40 mM DTT)中 100℃ 煮沸 10 分钟使其变性,再在
1X GlycoBuffer 3 反应缓冲液中于 37℃ 温育。热失活:65℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X GlycoBuffer 3 反应缓冲液

分子量

Endo H:29,000 daltons。
 

质量保证

无糖苷外切酶污染,无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 的反应体系中,37℃ 条件下,1 小时从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量(10 NEB units = 1 IUB milliunit)。

浓度

Endo H 浓度:500,000 units/ml。
 

注意事项

酶活性不受 SDS 影响。

要使天然糖蛋白去糖基化,可能需要增加酶量并延长温育时间。